本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用。背景技術(shù)：視網(wǎng)膜色素變性(retinitispigmentosa，rp)是一組視網(wǎng)膜光感受器異常導(dǎo)致的遺傳性致盲眼底病，在全世界的發(fā)病率約為1/3000～1/4000，而在中國人群的發(fā)病率可達(dá)1/3500，由于我國人口眾多，rp患者可達(dá)三十萬之眾，給家庭和社會(huì)帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。目前針對(duì)rp的診斷和面臨許多困難，尚無有效的手段，這主要?dú)w因于其在臨床表型和遺傳上具有高度的異質(zhì)性，針對(duì)其病理機(jī)制系統(tǒng)研究不足。典型的rp患者早由于視桿細(xì)胞功能缺陷而出現(xiàn)夜盲和視野狹窄，逐步發(fā)展為管狀視野，直至失明；眼底檢查可見視網(wǎng)膜色素沉著。在病理學(xué)方面，典型的rp主要影響視桿細(xì)胞，造成視桿細(xì)胞死亡并繼發(fā)視錐細(xì)胞死亡，主要表現(xiàn)為光感受器受損、變性，視網(wǎng)膜外核層逐漸變薄直至消失，視網(wǎng)膜外網(wǎng)層及其他相關(guān)細(xì)胞層出現(xiàn)相應(yīng)病理改變。此外，由于rp在臨床表型和遺傳模式上均具有高度的異質(zhì)性，導(dǎo)致許多的rp致病機(jī)制尚不清楚，這為rp疾病的臨床診斷帶來極大困難，因此針對(duì)rp疾病的致病機(jī)制研究迫在眉睫。而目前，缺乏相應(yīng)的rp疾病模型。控制原發(fā)病，遏制其誘導(dǎo)的全身失控性炎癥反應(yīng)，是預(yù)防和ALI/ARDS的必要措施。上海兔動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

方法在動(dòng)物身上誘發(fā)出來，因此大家十分重視對(duì)自發(fā)的動(dòng)物疾病模型的開發(fā)，有的學(xué)者甚至對(duì)狗、貓的疾病進(jìn)行大規(guī)模的普查，以發(fā)現(xiàn)自發(fā)性疾病的病例，然后通過遺傳育種，將這種自發(fā)性疾病模型保持下來，并培育成具有特定遺傳性狀的突變系，以供研究。許多動(dòng)物遺傳病的模型就是通過這樣的方法建立的。在這方面小鼠和大鼠的各種自發(fā)性疾病模型開發(fā)和應(yīng)用得多。這類模型在遺傳病、代謝病、免疫缺陷病、內(nèi)分泌疾病和等方面的應(yīng)用正日益增多。(二)誘發(fā)性或?qū)嶒?yàn)性動(dòng)物模型(ExperimentalAnimalModels)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型是指研究者通過使用物理的、化學(xué)的和生物的致病因素作用于動(dòng)物，造成動(dòng)物組織、或全身一定的損害，上海裸鼠動(dòng)物模型造模通過高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。

長久以來人們發(fā)現(xiàn)，以人本身作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象來推動(dòng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展是困難的，臨床所積累的經(jīng)驗(yàn)不僅在時(shí)間和空間上存在著局限性，許多實(shí)驗(yàn)在道義上和方法學(xué)上還受到種種限制。而動(dòng)物模型的吸引力就在于它克服了這些不足點(diǎn)，其在生物醫(yī)學(xué)研究中所起到的獨(dú)特作用，正受到越來越多的科技工作者的重視。動(dòng)物模型的優(yōu)越性主要表現(xiàn)在以下幾下方面。(一)避免了在人身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所帶來的風(fēng)險(xiǎn)臨床上對(duì)外傷、中毒、腫痛病因等研究是有一定困難的，甚至是不可能的，如急性和慢性呼吸系統(tǒng)疾病研究進(jìn)很難重復(fù)環(huán)境污染的作用。輻射對(duì)機(jī)體的損傷也不可能在人身上反復(fù)實(shí)驗(yàn)。而動(dòng)物可以作為人類的替難者，在人為設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件下反復(fù)觀察和研

動(dòng)物模型是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中按特定設(shè)計(jì)用動(dòng)物模擬人體的一種模型。一般用于毒理、藥理、病理、生理甚至心理的實(shí)驗(yàn)研究。醫(yī)學(xué)的許多實(shí)驗(yàn)研究不允許或沒有必要直接在人體上進(jìn)行，可以根據(jù)需要，在實(shí)驗(yàn)控制條件下，在動(dòng)物身上制造出類似人體上的毒理、藥理、清理、生理過程以研究其機(jī)制和規(guī)律。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用的有小鼠、大鼠、家兔、狗、猴等。小動(dòng)物模型多用于篩選實(shí)驗(yàn)，大動(dòng)物模型多用于實(shí)驗(yàn)***和中毒機(jī)理的研究。中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中越來越多地運(yùn)用著動(dòng)物模型，并正形成符合中醫(yī)藥原理的新的動(dòng)物模型和造模方法。特發(fā)性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立。

動(dòng)物模型是醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中按特定設(shè)計(jì)用動(dòng)物模擬人體的一種模型。一般用于毒理、藥理、病理、生理甚至心理的實(shí)驗(yàn)研究。醫(yī)學(xué)的許多實(shí)驗(yàn)研究不允許或沒有必要直接在人體上進(jìn)行，可以根據(jù)需要，在實(shí)驗(yàn)控制條件下，在動(dòng)物身上制造出類似人體上的毒理、藥理、清理、生理過程以研究其機(jī)制和規(guī)律。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常用的有小鼠、大鼠、家兔、狗、猴等。小動(dòng)物模型多用于篩選實(shí)驗(yàn)，大動(dòng)物模型多用于實(shí)驗(yàn)和中毒機(jī)理的研究。中醫(yī)藥現(xiàn)代研究中越來越多地運(yùn)用著動(dòng)物模型，并正形成符合中醫(yī)藥原理的新的動(dòng)物模型和造模方法。四氯化碳誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠模型。上海兔動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

卵巢早衰（POF）是多種病因所致的卵巢功能衰竭。上海兔動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室

所用儀器為bio-rad的化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)。結(jié)果見圖1中c和d，可以看出，通過免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網(wǎng)膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達(dá)。實(shí)施例2本實(shí)施例以小鼠為目標(biāo)動(dòng)物，對(duì)本發(fā)明提供的視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的構(gòu)建方法進(jìn)行說明，gm20541基因敲除的路線如圖2所示，具體操作如下：基因敲除小鼠獲取步驟：1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報(bào)告基因gfp的表達(dá)框、有neo抗性基因的表達(dá)框、兩端有同向排列l(wèi)oxp位點(diǎn)的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個(gè)外顯子；2利用dna同源重組技術(shù)將gm20541基因中的第3個(gè)外顯子替換，得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細(xì)胞；3利用步驟2得到的胚胎干細(xì)胞制備得到含gm20541基因敲除細(xì)胞的嵌合體小鼠(圖2)；4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定：實(shí)施例2中長距離pcr鑒定陽性子一代鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，擴(kuò)增5’端長臂使用引物對(duì)gm5’lrf和sa3’r，擴(kuò)增產(chǎn)物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結(jié)果見圖3中a。上海兔動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)室