本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)工程技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種利用gm20541基因構(gòu)建視網(wǎng)膜色素變性疾病模型的方法和應(yīng)用。背景技術(shù)：視網(wǎng)膜色素變性(retinitispigmentosa，rp)是一組視網(wǎng)膜光感受器異常導(dǎo)致的遺傳性致盲眼底病，在全世界的發(fā)病率約為1/3000～1/4000，而在中國人群的發(fā)病率可達(dá)1/3500，由于我國人口眾多，rp患者可達(dá)三十萬之眾，給家庭和社會帶來了沉重的負(fù)擔(dān)。目前針對rp的診斷和面臨許多困難，尚無有效的手段，這主要?dú)w因于其在臨床表型和遺傳上具有高度的異質(zhì)性，針對其病理機(jī)制系統(tǒng)研究不足。典型的rp患者早由于視桿細(xì)胞功能缺陷而出現(xiàn)夜盲和視野狹窄，逐步發(fā)展為管狀視野，直至失明；眼底檢查可見視網(wǎng)膜色素沉著。在病理學(xué)方面，典型的rp主要影響視桿細(xì)胞，造成視桿細(xì)胞死亡并繼發(fā)視錐細(xì)胞死亡，主要表現(xiàn)為光感受器受損、變性，視網(wǎng)膜外核層逐漸變薄直至消失，視網(wǎng)膜外網(wǎng)層及其他相關(guān)細(xì)胞層出現(xiàn)相應(yīng)病理改變。此外，由于rp在臨床表型和遺傳模式上均具有高度的異質(zhì)性，導(dǎo)致許多的rp致病機(jī)制尚不清楚，這為rp疾病的臨床診斷帶來極大困難，因此針對rp疾病的致病機(jī)制研究迫在眉睫。而目前，缺乏相應(yīng)的rp疾病模型。通過高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建非酒精性脂肪肝模型。上海外包動物模型飼養(yǎng)

上海研錄生物科技有限公司無論是自發(fā)還是誘發(fā)模型，都能夠較好的復(fù)制AD相關(guān)的病理及生理特征，但是昂貴的費(fèi)用與稀少的資源限制了非人靈長類動物的大量應(yīng)用。嚙齒類動物雖然在病變模擬方面不如非人靈長類，但是具有價格低廉、資源、生存率高等特點(diǎn)，與人類的腦部解剖結(jié)構(gòu)與生理特征也較為相近，更適于誘導(dǎo)模型的大量制備，成為AD應(yīng)用的動物模型。許多AD小鼠模型的背景品系是C57BL/6J小鼠，然而這種品系的小鼠似乎對類似AD的神經(jīng)病理學(xué)具有特別的抵抗力。上海乳鼠動物模型實(shí)驗(yàn)用血管內(nèi)線栓阻斷法制備大鼠 MCAO模型。已被腦血管病研究者接受和采用。

中風(fēng)模型）股動脈內(nèi)皮損傷模型頸動脈結(jié)扎或部分結(jié)扎術(shù)深靜脈血栓模型下肢缺血模型門腔靜脈分流術(shù)左、右心血流動力學(xué)測試左心系統(tǒng)測壓右心系統(tǒng)測壓腹部手術(shù)膽管結(jié)扎術(shù)胃大部切除術(shù)小腸部分切除術(shù)急性腎衰模型單側(cè)腎切除術(shù)3/4腎切除術(shù)5/6腎切除術(shù)脾切除術(shù)腎上腺切除術(shù)腎上腺髓質(zhì)摘除術(shù)骨關(guān)節(jié)炎模型脾神經(jīng)切除術(shù)肝臟迷走神經(jīng)切斷術(shù)胃迷走神經(jīng)切斷術(shù)膈下迷走神經(jīng)切斷術(shù)去勢術(shù)輸精管結(jié)扎術(shù)卵巢切除術(shù)單側(cè)或雙側(cè)輸卵管結(jié)扎術(shù)子宮切除術(shù)輸尿管結(jié)扎術(shù)神經(jīng)系統(tǒng)手術(shù)單側(cè)腦內(nèi)定位插管雙側(cè)腦內(nèi)定位插管側(cè)腦室導(dǎo)管側(cè)腦室微量滲透泵導(dǎo)管第3腦室插管腓腸肌神經(jīng)切除術(shù)軟組織手術(shù)甲狀腺切除術(shù)甲狀旁腺切除術(shù)甲狀腺切除術(shù)伴甲狀旁腺再植入術(shù)胸腺切除術(shù)松果體切除術(shù)垂體切除術(shù)傳感器植入手術(shù)血壓遙測左心室壓遙測門靜脈壓遙測血壓與心電圖遙測血壓與腦電圖遙測胸內(nèi)壓遙測胸內(nèi)壓與心電圖遙測心電圖遙測腦電圖遙測肌電遙測心電圖與腦電圖遙測腦電圖與肌電遙測血糖遙測體溫與活動度遙測血管導(dǎo)管手術(shù)頸動脈導(dǎo)管顱內(nèi)給藥頸動脈導(dǎo)管腹主動脈導(dǎo)管股動脈導(dǎo)管股靜脈導(dǎo)管單側(cè)頸靜脈導(dǎo)管雙側(cè)頸靜脈導(dǎo)管門靜脈導(dǎo)管下腔靜脈導(dǎo)管非血管導(dǎo)管手術(shù)膽管導(dǎo)管胃導(dǎo)管十二指腸導(dǎo)管空腸導(dǎo)管回腸導(dǎo)管盲腸導(dǎo)管結(jié)腸導(dǎo)管膀。

實(shí)驗(yàn)動物本模型可用大、小鼠實(shí)驗(yàn)動物造模，主要介紹在小鼠上的造模過程。8周齡，24g體重的SJL/J小鼠試劑耗材1、實(shí)驗(yàn)試劑噁唑酮、橄欖油、無水乙醇、1mL注射器、軟管（可用膽汁插管的軟管）、渦旋儀2、試劑配制配制橄欖油與**比例為1:4（v:v）的均勻混合溶液用水稀釋無水乙醇得到50%乙醇稱取一定量的噁唑酮，使用橄欖油/**混合液溶劑，配置成3%的噁唑酮給藥溶液或者用50%的無水乙醇配制得到1%的噁唑酮給藥溶液。3、造模小鼠背部去毛（1.5x1.5cm），取配制好的1%噁唑酮溶液（50%乙醇溶解）或者3%（橄欖油/**混合液溶解）150μL均勻涂抹在去毛位置，七天后，動物稱重并標(biāo)記，小鼠麻醉后使用1ml注射器通過軟管將100μL的噁唑酮給藥溶液緩慢注射進(jìn)入小鼠直腸內(nèi)（軟管臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復(fù)制出來。

我們知道WB實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，一次實(shí)驗(yàn)歷時也不短，從提蛋白到顯影結(jié)束可能要三天，我們就講一下這里面的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)。一、蛋白提取及變性1、提取蛋白很多經(jīng)驗(yàn)豐富的WB實(shí)驗(yàn)者都深有體會，蛋白提取是影響結(jié)果重要的環(huán)節(jié)之一。該過程重要的是防降解和保證蛋白濃度不要太低。防降解主要有兩點(diǎn)，一是裂解前注意保持樣品處于低溫環(huán)境中，二是裂解時加入足夠的蛋白酶抑制劑。我們習(xí)慣先用冰冷的PBS做心臟的體循環(huán)灌注，然后冰上取腦，分離各腦區(qū)(嗅球，皮層，海馬，中腦，小腦，延髓，丘腦，紋狀體)后置于，用液氮速凍后轉(zhuǎn)移至-80度冰箱長期保存。接著是保證蛋白濃度，即要加入適量的裂解液，加太少會使蛋白提取不充分，加太多會讓蛋白濃度太低，一般經(jīng)驗(yàn)是這樣的，細(xì)胞樣品例如一個六孔板的細(xì)胞加60微升的裂解液，動物組織的話每毫克組織加10微升裂解液。還要加上超聲破碎處理，具體方案見討論部分。如果沒有超聲破碎儀，那就用1毫升注射器不斷抽吸，冰上反復(fù)抽吸1分鐘左右，注意不要產(chǎn)生過多氣泡。(需要灌注取材的視頻可以私聊獲取，由于文件過大，又比較血腥，不宜直接放到文章里。)2、蛋白變性加入上樣緩沖液后100攝氏度煮10分鐘，這里的上樣緩沖液有兩種可選。心力衰竭(heart failure)簡稱心衰,是指由于心臟的收縮功能和(或)舒張功能發(fā)生障礙。上海乳鼠動物模型實(shí)驗(yàn)

特發(fā)性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是臨床上具有代表性的一種慢性纖維化性肺。上海外包動物模型飼養(yǎng)

人源化小鼠模型屬于典型的基因動物模型，通過異種移植（從一個物種取得并移植到另一個物種）產(chǎn)生更精確的反映了人類可比較的疾病狀態(tài)，用于對臨床前藥物**和有效性進(jìn)行測試、加速新藥的開發(fā)和驗(yàn)證，實(shí)現(xiàn)個性化醫(yī)學(xué)或藥物。（1）獨(dú)特基因組的動物模型：用于研究人類特定基因或相關(guān)疾病的性質(zhì)；（2）基因敲除動物模型：研究基因功能，開發(fā)新的**方法和相關(guān)策略；（3）插入微生物基因動物模型：研究其在治病過程中的作用；（4）插入報告基因的動物模型：研究檢測基因的表達(dá)[4]。上海外包動物模型飼養(yǎng)